Infecto-contagiosas/Epidemias - Diagnstico de Herpes Genital por PCR em Tempo Real na Prtica Clnica de Rotina
Esta página já teve 88.934.966 acessos - desde 16 maio de 2003. Média de 26.983 acessos diários
home | entre em contato
 

Infecto-contagiosas/Epidemias

Diagnstico de Herpes Genital por PCR em Tempo Real na Prtica Clnica de Rotina
22/01/2005
 


 

O isolamento do vrus na cultura de clulas reconhecido como o padro ouro para o diagnstico de herpes genital. Embora evidncias crescentes indiquem que a reao em cadeia da polimerase (PCR) fornece um mtodo de diagnstico mais rpido e sensvel, sua implementao na prtica de diagnstico de rotina tem sido limitada por preocupaes com contaminao e custo. Pesquisadores do Reino Unido realizaram um estudo, recentemente publicado na revista Sexually Transmitted Infections, com o objetivo de avaliar a praticabilidade de substituir a cultura de vrus por PCR para o diagnstico de herpes genital em lugares que servem grandes populaes de atendimentos da medicina genito-urinria (MGU).

 

Esfregaos genitais coletados de 233 atendimentos consecutivos da MGU com suspeita de herpes genital foram testados em paralelo por cultura de vrus e PCR automatizado em tempo real. Trs mtodos de preparao das amostras foram avaliados e a confiabilidade do ensaio foi avaliada por teste repetido, comparao com um ensaio comercialmente disponvel e anlise da seqncia do vrus herpes simplex (HSV). Sondas de temperatura de fuso foram utilizadas para diferenciar entre os tipos de HSV sem passos ps-PCR adicionais.

 

O HSV foi detectado em 79/233 amostras (34%) pela cultura de vrus e em 132/233 amostras (57%) por PCR. A tcnica de PCR aumentou significativamente a deteco do HSV tanto em apresentaes precoces (< cinco dias) quanto tardias (≥ cinco dias) e tanto em episdios primitivos quanto recorrentes. A deteco do HSV e a tipagem por PCR foram alcanadas dentro de um perodo menor que quatro horas, levando a uma significativa reduo no trabalho em comparao com a cultura de vrus. A maioria das amostras (120/132, 91%) foram tipadas como HSV-2. Os resultados foram altamente reprodutveis.

 

Os autores concluram que a tcnica de PCR em tempo real um mtodo eficiente de trabalho, rpido e altamente reprodutvel para a deteco do HSV em esfregaos genitais, e que sua implementao factvel na prtica de diagnstico de rotina.

 Diagnosis of genital herpes by real time PCR in routine clinical practice - Sexually Transmitted Infections; 2004; 80: 406-410.

Diagnosis of genital herpes by real time PCR in routine clinical practice

M Ramaswamy1, C McDonald2, M Smith3, D Thomas3, S Maxwell3, M Tenant-Flowers2 and A M Geretti1

1 Royal Free and University College Medical School, Department of Virology, Hampstead Site, Rowland Hill Street, London NW3 2PF, UK
2 Department of Genitourinary and HIV Medicine, Caldecot Centre, Kings College Hospital, London SE5 9RS, UK
3 Department of Infection and Health Protection Agency, Guys Kings and St Thomass School of Medicine, Kings College Hospital, East Dulwich Grove, London SE22 8QF, UK

Correspondence to:
A M Geretti
Royal Free and University College Medical School, Department of Virology, Hampstead Site, Rowland Hill Street, London NW3 2PF, UK; a.geretti@rfc.ucl.ac.uk

Background: Virus isolation in cell culture is the recognised diagnostic gold standard for genital herpes. Although increasing evidence indicates that polymerase chain reaction (PCR) provides a more rapid and sensitive diagnostic method, its implementation in routine diagnostic settings has been limited by concerns over contamination and cost.

Objective: To evaluate the feasibility of replacing virus culture with PCR for the diagnosis of genital herpes in settings serving large populations of genitourinary medicine (GUM) attendees.

Methods: Genital swabs collected from 233 consecutive GUM attendees with suspected genital herpes were tested in parallel by virus culture and automated real time PCR. Three specimen preparation methods were evaluated and the assay reliability was assessed by repeat testing, comparison with a commercially available assay, and herpes simplex virus (HSV) sequence analysis. Probe melting temperatures (Tm) were used to differentiate between HSV types without additional post-PCR steps.

Results: HSV was detected in 79/233 (34%) samples by virus culture and 132/233 (57%) samples by PCR. PCR significantly increased HSV detection in both early (<5 days) and late (>=5 days) presentations and in both first and recurrent episodes. HSV detection and typing by PCR was achieved within less than 4 hours leading to a significant reduction in labour compared to virus culture. Most specimens (120/132, 91%) were typed as HSV-2. Results were highly reproducible.

Conclusions: Real time PCR is a highly reproducible, rapid, and labour efficient method for HSV detection in genital swabs. Its implementation is feasible in routine diagnostic settings.

Abbreviations: BSA, bovine serum albumin; CPE, cytopathic effect; FCS, fetal calf serum; GUM, genitourinary medicine; HSV, herpes simplex virus; MEM, minimal essential medium; PCR, polymerase chain reaction; PEG, polyethylene glycol; Tm, melting temperatures; VTM, viral transport medium

Keywords: genital herpes; polymerase chain reaction; herpes simplex virus



IMPORTANTE

  •  Procure o seu médico para diagnosticar doenças, indicar tratamentos e receitar remédios. 
  • As informações disponíveis no site da Dra. Shirley de Campos possuem apenas caráter educativo.
Publicado por: Dra. Shirley de Campos
versão para impressão

Desenvolvido por: Idelco Ltda.
© Copyright 2003 Dra. Shirley de Campos